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甲醛吸入染毒大鼠致多组织细胞DNA损伤作用研究
hc360慧聪网医疗器械行业频道 2004-05-26 10:07:14
    我们通过建立大鼠吸人染毒模型，应用单细胞凝胶电泳技术研究甲醛所致组织细胞DNA损伤情况。
     1．材料和仪器：正常熔点、低熔点琼脂糖、肌氨酸钠、Triton X-100、碘化丙啶(PI)、蛋白酶K(PK)和8-羟基喹啉等均为sigma公司产品；大鼠淋巴细胞分离液购白天津血液病研究所。DYY-Ⅲ-6B型稳压、稳流可调试电泳仪(北京六一仪器厂)；BX51型日本Olympus荧光显微镜并配有CCD纤维摄像装置；甲醛检测仪(美国)。
    2．实验动物及分组：选用本所二级动物房提供的纯种健康雄性Wistar大鼠10只(体重100 g左右)，随机分为两组，即对照组和处理组。处理组从9时至13时接受气体甲醛染毒，染毒浓度为13.5 mg／m3，每天4h，连续染毒7d；对照组也在同等条件下的染毒柜内，但不染毒。染毒柜内甲醛浓度采用甲醛测定仪测定。动物自由进食和饮水(自来水)每周计算进食量并称量体重。对照组和处理组在进食量和体重增长方面均未见统计学意义。染毒结束后动物禁食24h后，先行乙醚麻醉，取眶下静脉血分离外周血淋巴细胞，之后行断头处死，取新鲜组织(脑、肝和肺)于碎冰上分离细胞，光学显微镜下计算细胞存活率。
    3．方法：荧光显微镜采用G激发光，目镜10×，物镜40×，通过CCD显微拍摄装置及Metaph Benes 4.5分析软件，每一样本随机拍摄约50个细胞并保存记录，随后应用该软件对图像进行分析，分析指标为DNA移动距离(1xm)，统计学处理采用成组设计的t检验。
    4．结果与分析：甲醛致大鼠组织细胞DNA损伤作用。
    甲醛吸人组大鼠外周血淋巴细胞、肝细胞、肺细胞和脑细胞DNA移动距离与对照组比较未有统计学意义；在经过蛋白酶K(PK)消化后，甲醛吸人组大鼠外周血淋巴细胞、肝细胞、肺细胞和脑细胞DNA移动距离均显著增加，其增加量明显高于对照组。
    本研究结果表明，甲醛吸人组大鼠外周血淋巴细胞、脑细胞、肝细胞和肺组织细胞DNA在经过PK消化后，细胞DNA移动距离明显高于对照组，据此可初步判断用13.5mg／m3的气态甲醛染毒大鼠可致大鼠组织细胞发生DNA-蛋白质交联。若此种损伤方式不被细胞DNA修复系统所识别修复，则可能成为日后甲醛致癌的一个危险因素，而且不表现组织特异性，常常是多个器官同时受累，这也许可以解释甲醛毒性效应的多系统性。甲醛所致DNA-蛋白质交联能否最终用于人暴露甲醛遗传毒性的生物标志物研究尚需进一步的实验资料。hc360慧聪网医疗器械行业频道  慧聪医疗器械  医疗器械  医疗设备 手术器械 保健器材 卫生材料
信息来源： 杨丹凤 袭著革 张华山等
 
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