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乳腺癌中KAll蛋白表达与临床病理特征的相关性

hc360慧聪网医疗器械行业频道 2004-09-01 23:04:15

[摘要] 目的：研究KAll蛋白在人乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法：应用免疫组织化学S-P法检测107例乳腺癌及30例癌旁乳腺组织中的KAll蛋白表达情况。结果：乳腺癌组中KAll蛋白高表达率显著低于正常乳腺组织(P<0.05)。正常组织及非侵袭性乳腺癌中，KAll蛋白呈高表达；反之，在浸润性乳腺癌中KAll表达减少。伴有腋窝淋巴结转移的61例乳腺癌中，KAll蛋白高表达率为21.3％(13／61)，无腋窝淋巴结转移组46例中，KAII蛋白高表达率为39.0％(18／46)，两者差异有显著性(P<0.05)。同时发现KAll蛋白表达与肿瘤大小、年龄无相关性。结论：在乳腺癌进展过程中，KAll蛋白表达降低在乳腺癌浸润和转移过程中起着重要的作用，检测KAll蛋白表达可能成为监测人乳腺癌进展及临床上判断其预后的重要参考指标。 [关键词] 乳腺肿瘤；转移抑制基因；KAll；免疫组织化学 KAll基因是近年发现的一个新的肿瘤转移抑制基因，Dong等^[1]首先从前列腺癌细胞系中分离鉴定，以后陆续有研究证明，在多种癌组织和细胞系中检测到KAll在分子水平上的表达，然而它在蛋白水平特别是在乳腺癌中的表达情况，国内外报道少见。为进一步了解KAll基因在乳腺癌发生发展中的作用，我们应用抗KAll单克隆抗体，研究它在乳腺癌中的表达及其与癌细胞侵袭、淋巴结转移的关系。材料和方法一、标本收集我院2001年8月-2003年2月间乳腺癌根治或改良根治标本存档材料共107例，患者年龄31-74岁，中位年龄51.6岁。取存档切片，统一复检。按WHO国际肿瘤组织学分类标准，浸润性导管癌76例，导管内癌为主的浸润性导管癌8例，导管内癌13例，浸润性小叶癌6例、粘液腺癌和鳞癌各2例。其中伴淋巴结转移(LN+)61例，未伴淋巴结转移(LN-)46例。并随机取肿块旁正常乳腺组织(距肿瘤边缘5 cm以外)标本30例，用于对照。鼠抗人KAll基因单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，免疫组化试剂盒购自北京中山生物有限公司。二免疫组化染色取存档蜡块，4 μm厚切片，行过氧化物酶标记的链霉菌素-生物素(SP)染色，工作浓度为1：50，具体按常规SP法操作。阴性对照采用PBS缓冲液代替一抗。三评定标准染色结果采用四级分法，并参考相关文献^[2]：无阳性细胞(-)，阳性细胞数<25％(+)，阳性细胞数25％-50％(++)，阳性细胞>50％(+++)；免疫组化阳性为胞膜上出现棕黄或棕褐色颗粒。结合本研究，将(-)、(+)计为低表达，(++)、(+++)计为高表达。四统计处理采用X²或其校正检验，P<0.05和P<0.01分别为差异具有显著性和非常显著性。结果一 KAll蛋白在正常乳腺组织及乳腺癌中的表达免疫组化显示，KAll阳性棕黄色颗粒主要分布于细胞膜上。本组癌旁正常乳腺组织高表达与乳腺癌组织高表达相比，差异具有显著性(X²=15.74，P<0.01)。浸润性乳腺癌组KAll蛋白高表达率显著低于非浸润性乳腺癌组和正常乳腺组(分别为x²=5.77，P<0.05和X²=16.95，P<0.01)。二 KAll蛋白在不同组织学类型浸润性乳腺癌中的表达在浸润性乳腺癌各组织学类型中，浸润性导管癌KAll蛋白高表达为31.6％(24／76)，管内癌为主的浸润性导管癌为12.5％(1／8)，浸润性小叶癌为66.7％(4／6)。由于浸润性乳腺癌各组织学类型样本数过少，未行统计学处理。三 KAll蛋白表达与淋巴结转移的关系在无腋窝淋巴结转移的乳腺癌中，KAll高表达率为39.0％(18／46)，有淋巴结转移组高表达率为21.3％(13／61)，两者比较差异有显著性(X²=4.04，P<0.05)。伴淋巴结转移的乳腺癌组KAll蛋白高表达率明显低于无淋巴结转移组，表明KAll基因与淋巴结转移有关。四 KAll蛋白表达与乳腺癌肿瘤大小和乳腺癌患者年龄的关系肿块最大直径≤2 cm者的KAll蛋白高表达率与>2 cm者的KAll蛋白高表达率相比，两者差异无显著性(X²=1.10，P>0.05)。<50岁的乳腺癌患者的KAll蛋白高表达率与≥50岁的KAll蛋白高表达率相比，两者差异也无显著性(X²=1.25，P>0.05)。以上表明KAll基因的蛋白表达肿瘤大小和患者年龄无明显相关性。讨论乳腺癌的一个重要恶性生物学特征是易早期发生转移，而癌细胞向远处组织器官的转移是威胁患者生存最危险的信号之一。未发生转移的乳腺癌患者其治愈率可超过90％，一旦癌细胞转移，那么患者的远期生存率会随转移范围而下降。统计数字表明，转移至内脏和脑的乳腺癌患者，其五年生存率不足20％，因此早期预测乳腺癌侵袭能力及淋巴结转移趋势对临床上判断预后及制定合理的治疗方案，具有重要的指导意义。肿瘤的侵袭和转移需要多种基因共同调控^[3]，其中转移抑制基因的作用更受瞩目，它的丢失或表达下降可诱导癌转移的发生。KAll基因位于人11P11．2-13，它编码含有267个氨基酸的蛋白质CD82，这是一种细胞表面糖蛋白，属于跨膜4超家族(transmembrane 4 superfamily，TM4SF)成员，有4个亲水的跨膜区和一个细胞外N-端糖基化区，可能介导细胞与细胞或细胞与细胞外基质之间的相互作用，影响肿瘤细胞的侵袭和转移能力。Yang等^[4]进一步研究，将人KAll cDNA转染人两个高度恶性乳腺癌细胞系LCC6和MDA-MB-231，然后注入裸鼠的乳腺间隙脂肪及静脉注射，设对照组相比较，观察实验性和自发性的肺转移，结果KAll的高表达明显抑制了LCC6细胞系的转移潜能，其转移抑制与软琼脂中肿瘤生长率和集落数形成减少有关。另有初步研究显示^[5]，KAll高表达可提高非钙依赖的细胞凝聚力，抑制细胞在体外的运动能力和侵袭力，使细胞对纤粘连蛋白的结合力及细胞的迁移力下降。此外，KAll基因表达还能明显降低肿瘤细胞在体内的吞噬活性，减少静脉注射肿瘤细胞在肺部形成的集落数。这些都提示KAll可能调节细胞与细胞之间的相互作用，但其具体作用机制尚不清楚，有待深入研究。 KAll最初被认为是前列腺癌的转移抑制基因，以后的研究发现，它与多种人类肿瘤的进展有关^[6]，最近这种基因与乳腺癌的关系也初露端倪。Yang等^[7]发现将单一拷贝的neoll导入具有高度转移性的MDA-MB435乳腺癌细胞系后，可抑制乳腺癌的转移，且在转染了11号染色体的MDA-MB-435细胞系中KAllm RNA表达较高。将neoll导人一种永生的正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及具有从低到高不同恶性程度乳腺癌细胞系中，结果发现KAllm RNA表达呈进行性下降。随后，Yang等^[8]采用了Westernblot蛋白分析法和免疫组化法检测了不同乳腺癌细胞系中KAll蛋白表达，结果显示，KAll蛋白水平与KAllmRNA水平呈平行变化，并与乳腺癌细胞转移潜能呈负相关。目前，虽然在KAll基因在体外细胞系中的研究已提示该基因与乳腺癌有关，但在人乳腺癌组织中有关KAll表达甚少，关于它的蛋白表达情况国内尚未见报道。本研究用免疫组化方法检测了107例乳腺癌和30例癌旁正常乳腺组织中KAll蛋白表达情况，结果乳腺癌KAll高表达率(39／107)36.4％，而癌旁正常组织则为(22／30)73.3％，两者差异具有显著性(P<0.01)。这说明在正常乳腺组织中表达一定水平的内源性KAll，而在乳腺癌中KAll表达显著降低。我们发现在浸润性乳腺癌组，KAll蛋白高表达率显著低于非浸润性乳腺癌组(P<0.05)，与Yang等^[7]报道基本一致，他们用免疫组化法对81例乳腺癌标本中KAll蛋白表达进行检测，发现在正常乳腺组织和非侵袭性乳腺癌(原位导管癌)中KAll蛋白呈高表达，而在大多数浸润性乳腺肿瘤中，KAll表达减少。我们研究显示KAll蛋白表达与肿块大小及患者年龄无明显相关性。同时发现，不伴有淋巴结转移组乳腺癌患者KAll蛋白高表达率为39.0％，显著高于伴淋巴结转移组KAll蛋白高表达率(21.3％)。上述结果提示，KAll基因表达降低与乳腺癌区域淋巴结转移及乳腺癌的侵袭力密切相关。李珊珊等^[9]应用原位杂交法观察了KAllmRNA在转移性和非转移性乳腺癌组织中的表达，结果显示转移性乳腺癌病例中KAll阳性表达率显著低于非转移性乳腺癌病例，本研究结果也与其相符。因此，对KAll表达的检测有可能为判断乳腺癌恶性程度及患者预后提供线索。由于本研究中浸润性乳腺癌各组织学类型例数过少，不能代表总体信息，无法进行统计学处理，尚需扩大样本量作进一步研究。
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