摘 要 为研究rhIL-11联合rhG-CSF和CTX对C57BL/6小鼠外周造血干细胞的动员作用，将48只C57BL/6小鼠随机分为4组，3组d0给予一次腹腔注射200rug／kg的CTX，其中2组d1～d15分别皮下注射rhlL-11、rhlL-11加rhG-CSF,观察不同时间外周血白细胞、血小板计数、CD34+细胞比例、CFU-GM,CFU-MK及CFU-E的数量变化。结果发现，rhlL-11或联合rhG-CSF可明显促进CTX骨髓抑制小鼠外周血血小板和白细胞的恢复、提高外周血CD34+细胞比例及三系造血细胞集落数量。证明rhlL-11具有外周血造血干细胞动员作用，而与rhG-CSF和CTX联合动员效果更佳。
目前,自体外周血造血干细胞(HSC)动员方案多为中等偏大剂量的化疗联合G-CSF，动员的干细胞植入后的造血和免疫重建均明显快于骨髓移植，但血小板(PLT)的造血重建明显延期，常常需要输注PLT支持。rhlL-11是早期造血干细胞生长刺激因子之一，能促进骨髓粒、巨核祖细胞的增殖分化，明显提高外周白细胞(Wq3C)及PLT的数量，具有动员外周血造血干／祖细胞的作用[1]。因此，我们设计了rhlL-11联合rhC-CSF和CTX的动员方案，旨在寻求更高效的动员方案，为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 6-12周龄清洁级C57BL/6小鼠48只，体重20-24g,雌雄各半，由第一军医大学动物中心提供。
1.2 主要药品试剂和仪器 rhlL-11由厦门特宝生物工程有限公司赠送；rhG-CZF、重组小鼠干细胞刺激因子(rmSCF)、rhlL-3、EPO由Kirin公司提供，抗鼠CD34-FITC、抗鼠IgG2a-FITC等单抗均购自BD公司；培养基a-MEM和IMEM购自GIbco公司。其他包括环磷酰胺(上海华联制药有限公司)、流式细胞仪(FACS，Calibur，美国)、HeraeusOOb孵箱(B5060EK/CO2，德国)。
1.3 分组与给药方法 将48只C57BI√6小鼠随机分为4组：正常对照组、瓤，X组、rhIL-Il组及联合组；处理组第0天(d0)给小鼠一次性腹腔注射CTX 200mg／kg，次日(d1)起连续15天皮下注射rhIL-11 250ug·kg-1．d-1 (rhlL-11组)或rhILll+rhC-CSF(联合组，剂量均为250／ug·kg-1．d-1)，同时正常对照组及OX组给予等量生理盐水。
1.4 检测指标
1.4.1 外周血白细胞和血小板测定 分别于d0、1、3、5、7、9、11、13、15取小鼠尾静脉血，用常规方法进行WBC和PLT计数。
1.4.2 外周血CD34+细胞检测于d7、d9将小鼠用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，在无菌状态剖胸直视下心脏取血，采用FicOII-Hypague离心制备外周血单个核细胞(PB加n1C)，用P1踢洗涤2次后备用。取106个PBMNC加入FITC-CD34单抗2u1，进行单抗标记，另用抗鼠IgG2a-FITC单抗设立对照，用FACS检测CD34+细胞并分析其所占比例。
1.4.3 外周血造血干／祖细胞集落培养 粒细胞-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)和红细胞集落形成单位(CFU-E)的培养采用甲基纤维素培养体系：278／L甲基纤维素、胎牛血清、10％去离子牛血清白蛋白(BSA)、IM-DM培养液，1X105PBMNC／皿，培养CFU-GM时加入rhG-CSF，培养CFU-E时加入EPO。巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)培养采用血浆凝固块体系：牛血浆、10％BSA、0.1mmol／L巯基乙醇、a-MEM、TPO、IL-3和rlTl-SCF,2×10sPBMNC／皿；所有干／祖细胞培养皿均置于5％CO2、37℃培养箱中培养5～7天，在倒置显微镜下计集落数，CFU-MK在乙酰胆碱酯酶染色后计数。
1.5 统计学处理 采用SPSSl0.0软件包，对数据进行方差分析和t检验处理。
2 结 果
2.1 外周血WBC、PLT的变化 小鼠注射CTX后外周
2.3 外周血CD34+细胞变化 正常对照组小鼠外周血CD34+胞约为0.2％，在d7、d9ClX组分别为0.34％、0.4％，rhlL-11组为0.51％、0.8l％，而联合组达1.52％和3．00％，明显高于CTX组(P均<0.01)，与rhlL-11组相比也有显著性差异(P均<0.05)。
3 讨 论
IL-11是近年来研究较多的细胞因子，它是骨髓基质细胞分泌的一种早期干细胞刺激因子，对造血系统具有多效性。体内外研究结果表明IL-11可刺激造血祖细胞的生长和分化，尤其是促进巨核细胞增殖分化和血小板的生成。鉴于IL-11对巨核细胞系的特异性作用，美国1997年就已将其作为第一个在临床上应用于肿瘤病人大剂量化、放疗后升高血小板的药物批准上市，临床应用结果证明其疗效显著；在我国也已完成了该药的动物实验和Ⅲ期临床研究。
近年来随着对造血干细胞生物学活性认识的不断深入，应用外周造血干细胞移植治疗恶性肿瘤大有取代骨髓移植之趋势。rhG-CSF作为动员剂已广泛用于临床，效果显著，多数报道使用G-CSF动员时WBC以及各种造血细胞集落数均在第5天左右达高峰值，这时进行造血干细胞分离，可获得目标产量的CD34+细胞，移植后受者的造血及免疫重建均较快，但通常血小板的恢复血白细胞于d3降至最低值(1.31±0.21)X109／L，d15恢复至用药前水平。rhlL-11组及联合组也于d3降至最低值(1.61±0.17) ×109／L和(2.6士0.2)×109／L联合组的最低值明显高于CTX组(P<0.01)，而恢复至用药前水平的时间分别为dll和d9，明显提前。CTX组的外周血血小板计数dll达最低值(138±65) ×109／L，到d15(本实验结束时间)尚未恢复至用药前水平，而rhlL-11组及联合组均于d9降至最低值(281.5土43)X109／L和(276.8+69)X109／L，最低点也高于CTX组(P值分别为0.002、0.003)，恢复速度也明显加快。
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